Лабораторная диагностика акарапидоза

Лабораторная диагностика акарапидоза

Лучшим периодом для выявления акарапидоза у пчел является конец зимы и начало весны, перед выставкой пчел из зимовника, а также осень, перед уборкой пчел в зиму. Исследование пчел в эти сроки, в случае обнаружения у них болезни, позволит правильнее организовать мероприятия по борьбе с ней.

Быстрота и точность исследования значительно зависят и от качества поступившего в лабораторию патологического материала. Об этом важном условии пчеловоды часто забывают и доставляют в лабораторию, особенно в конце зимы и весной, почти непригодные для анализа трупы пчел. Недоброкачественный материал сильно затрудняет работу исследователя и снижает точность результатов. Для анализа на акарапидоз следует посылать не менее 50 штук живых или только что умерших пчел (свежий подмор) от каждой семьи. При взятии проб пчел в зимовнике (перед выставкой) выгребают со дна улья подмор и из него выбирают наиболее свежие трупы. Если же подходящих пчел в подморе нет, то из улья берут 50 штук живых. Если пчелы уже находятся на точке и подмора в ульях нет (он может оказаться под некоторыми ульями), пользоваться им нельзя, так как есть опасность при сборе смешать пчел одной семьи с другой. В таких случаях отправляют по 50 пчел из улья или еще лучше с прилетной доски, несущих обножку и нектар.

При пересылке ползающих пчел полезно из тех же семей направлять и 50 живых пчел, взятых из улья. Это избавит исследователя от ошибки, если в трахеях ползающих пчел нет Акараписа вуди. Одновременная проверка ползающих и летных пчел позволяет уточнить результаты анализа на акарапидоз, а в случае отсутствия его помогает разобраться в диагнозе. С целью определения эффективности лечения совершенно необходимо также микроскопическое исследование пчел. Для этого пригодны только живые пчелы, взятые из улья сразу по окончании лечения.

Упаковка и доставка материала на исследование. Пробу пчел от каждой семьи помещают в небольшую коробочку (удобно в спичечную), флакон или бумажный пакет, на которых пишут номер семьи. Затем их упаковывают в деревянный ящик, чтобы пчелы не помялись в пути. В сопроводительном письме указывают название хозяйства, количество образцов, из них номера подозрительных на акарапидоз семей, описание признаков болезни, периода их проявления и даты взятия проб. В особенно срочных случаях (живые пчелы) материал направляют с нарочным.

Для пересылки в лабораторию живых пчел после лечения можно использовать клеточки Титова или специальные для пересылки маток, обеспечив пчел небольшим количеством густого корма в виде канди или смоченного сахара-рафинада.

Методы лабораторного исследования пчел. Для диагностики акарапидоза должны применяться только такие методы исследования, которые дают точное и быстрое определение возбудителя болезни. Первооткрыватель акарапидоза доктор Д. Ренни предложил метод индивидуального (поштучного) исследования пчел. Для этого с помощью препаровальных игл у них вычленяют первую пару грудных трахей и исследуют под микроскопом на присутствие клещей. Этим методом устанавливают количество больных пчел в пробе и семье, степень поражения трахей акарапидозом, но он очень трудоемкий.

По методу К. Гейгера, пчел на несколько дней помещали в особую жидкость — диафанол, в которой они приобретали прозрачность, позволяющую через хитин увидеть расположение трахей и их состояние.

Профессор В. И. Полтев (1939) для определения акарапидоза у пчел рекомендовал метод исследования с использованием компрессориума. Пчел на ночь заливали 10%-ным раствором едкого калия. Затем пинцетом у каждой пчелы отрывали голову вместе с переднегрудью, ножницами параллельно этому отверстию срезали хитиновое колечко передней части среднегруди толщиной 1 мм вместе с мускулатурой. Колечко помещали на одну из клеток обычного компрессориума, на котором имеется 28 таких клеток и можно просматривать сразу целую пробу от семьи.

Существуют и другие методы лабораторной диагностики акарапидоза, но они не нашли широкого практического применения ввиду технической сложности их выполнения.

По результатам многолетних исследований установлено, что лучшим и самым надежным является метод индивидуального исследования пчел по Ренни.

Техника индивидуального исследования на акарапидоз. В журнал анализов заносят номер исследуемой семьи. Пробу пчелы помещают на предохранительное стекло (кусок обычного стекла) предметного столика штативной лупы с 10—16-кратным увеличением или бинокулярного микроскопа (МБС-1), и пинцетом в левой руке укрепляют ее в неподвижном состоянии ножками кверху. Затем препаровальной иглой в правой руке осторожно отчленяют у пчелы голову вместе с первым члеником груди и первой парой ножек, не задевая при этом мускулатуры груди. При этом обнаруживают оборванные концы первой пары грудных трахей, обращенные к средней линии тела, но главные стволы их еще скрыты под хитином. Далее следует аккуратно иглой надорвать хитин среднего членика груди со спинной стороны и осторожно отвернуть надорванные пластинки среднегруди в правую и левую стороны.

Сильно пораженные акарапидозом трахеи легко можно определить даже при слабом увеличении лупы по ненормальному состоянию их стенок, которые становятся желтыми, испещренными темными пятнами и даже черными. При легком прикосновении иглой они быстро разрушаются. Анализ можно прекращать на этой стадии, если исследователь не ставит перед собой специальной задачи, решение которой требует просмотра трахей под микроскопом. Чаще при вскрытии пчелы приходится встречать другую картину, по которой трудно определить под лупой состояние трахей.

Такие трахеи извлекают из груди пчелы и исследуют под микроскопом. Для этого концы трахей иглой отчленяют от стигм и переносят на предметное стекло в каплю воды. Сверху накрывают трахеи покрывным стеклом и препарат просматривают под микроскопом при увеличении в 56—100 раз. Трахею, даже только что пораженную клещом, не имеющую никаких патологических изменений в стенках, сразу можно определить по присутствию в ней иногда единственной самки клеща. Проникшая в трахею плодная самка первое время находится в конце, обращенном к стигмам, где и откладывает свои первые яйца. В связи с этим исследователь при анализе пчел на акарапидоз должен особое внимание уделять просмотру под микроскопом стигмальных концов главных стволов первой пары грудных трахей. Трахеи средней пораженности легко определить под микроскопом по изменившемуся цвету их стенок и наличию в трубочках взрослых клещей, личинок и яиц.

Для проверки строения клещей, личинок и яиц их необходимо извлечь из трахей. Это легко выполняется слабым нажатием пальца (лучше мизинца) на покровное стекло, под которым находятся трахеи. В силу хрупкости стенки пораженных трахей быстро разрушаются, и клещи свободно плавают в капле воды, среди которых есть личинки, нимфы и яйца.

Микроскопическая картина акарапидозных трахеи сильно изменяется в зависимости от стадии развития болезни, едва отличимой от здоровой трахеи в начале заражения до совершенно черной, абсолютно непохожей на нее, в конечной стадии развития акарапидоза.

В.С.Гапонова, О.Ф.Гробов «Клещевые болезни пчел»