Для диагностики энтерита норок

Для диагностики энтерита норок

При диагностике вирусного энтерита норок наиболее простой и доступной как для ветеринарных лабораторий, так и непосредственно в условиях хозяйств является реакция диффузионной преципитации в агарном геле (РДП).

Изучая серологические свойства этого вируса, мы ориентировались прежде всего на получение высокоспецифического неинфекционного антигена для РДП, который бы выявлял самые высокие титры преципитирующих антител у больных животных. Такие количества накапливаются у переболевших зверей через 20-30 дн. от начала заражения и равны разведениям 1:64-1:128.

С целью получения наибольшего выхода преципитиногена антиген вируса энтерита норок готовят следующим образом. Отторжения слизистой оболочки кишечника растирают до гомогенного состояния, ресуспенднруют в разведении 1:3 в физиологическом растворе NaCl (при меньшем разбавлении образуется суспензия в виде геля, непригодная для дальнейшей обработки).

Гомогенизируют в течение 30 мин при 30-40 тыс. об /мин, при этом разрушаются пораженные вирусом эпителиальные клетки кишечника, дополнительно замораживают и размораживают не более двух-трех раз. Трижды очищают хлороформом (20 % к объему суспензии) с последующим центрифугированием при 6-8 тыс. об/мин в течение 60 мин для осаждения обломков эпителиальных клеток и бактерий. Надосадочную жидкость после стандартизации инактивируют формалином, после чего ее можно использовать в качестве антигена для РДП. 0,3 %-ная концентрация формалина обеспечивает получение неинфицированного антигена при +37 °С в течение 48 ч, вместе с тем сохраняет его преципитирующие свойства.

У норок (по 4 головы в группе), которым вводили антиген, инактивированный 0,3 % формалина, отмечался самый высокий титр преципитинов 1:7 (табл.).

самый высокий титр преципитинов у норок

Для приготовления сывороток, нормальной и иммунной, использовали тех же норок, от которых отбирали материал для производства антигена. С этой целью у зверей брали кровь из вены хвоста до их перорального заражения вирусом энтерита, а для получения иммунной сыворотки — у тех же норок на 20-30-Й день после появления клинических признаков заболевания и также из вены хвоста или пункцией сердца при помощи шприца. Сыворотки консервировали мертиолятом в 0,001-0,005 % концентрации.

Для диагностики использовали антиген путем доведения его титра в РДП до 2 ед. специфического преципитиногена в объеме реакции 0,02 мл с иммунной сывороткой в титре 1:64 методом «шахматного» титрования.

Иммунную сыворотку с указанным титром, необходимую для стандартизации антигена, получали от норок, зараженных перорально штаммом Н-1926 на 20-й день после заболевания зверей (у зараженных особей максимальные титры преципитирующих антител). Ее титровали в РДП со стандартным антигеном и разводили до 1:8. Нормальную сыворотку от норок до их заражения разводили так же, как и иммунную. Разбавление антигена и сывороток до нужных концентраций можно производить физиологическим раствором хлористого натрия.

Полученные неинфекционные стандартные антигены и сыворотки являются строго специфичными в отношении вируса энтерита норок, образуют друг с другом только специфическую полоску преципитации и не имеют неспецифических полос преципитата.

Антиген вируса энтерита норок и сыворотки обладает стабильностью при +4 °С не менее одного года, а при —20 °С — не менее трех лет. Его можно хранить как в жидком, так и в лиофилизированном состоянии и использовать в реакции диффузионной преципитации в агаровом геле, задержке гемагглютинации и других серологических реакциях.

Р. Г. Дубовая, НИИ пушного звероводства и кролиководства

Виды сельскохозяйственной деятельности:
Рекомендуемые статьи